本发明公开了一种用于鉴定马铃薯腐烂茎线虫的RPA引物组，所述的RPA引物组包括由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的核苷酸序列组成的引物，以及由SEQ ID No.3所示的核苷酸序列组成的探针。还公开了含有上述引物组的检测试剂盒，以及利用上述引物组鉴定马铃薯腐烂茎线虫的恒温荧光扩增检测方法。本发明提供的RPA引物组及其检测方法对马铃薯腐烂茎线虫的检测具有特异性强、灵敏度高、检测速度快、反应温度低、操作简单、成本低等优点，能满足口岸检疫和现场实时检测的需要。